Саволҳои зуд-зуд пурсидашаванда оид ба фарҳанги ҳуҷайра

2. Ҳангоми аз нитрогени моеъ хориҷ кардани ҳуҷайраҳо барои барқароршавӣ чӣ гуна чораҳои бехатариро бояд андешид?

Криотрубаҳои ҳуҷайра дар нитрогени моеъ, ки пурра пӯшида нашудаанд ва нитрогени моеъ ба онҳо мерезанд, метавонанд боиси таркиш шаванд, агар ҳарорати криотруба ҳангоми обшавӣ якбора баланд шавад.Аз ин рӯ, тавсия дода мешавад, ки ҳангоми тоза кардани ҳуҷайраҳо аз нитрогени моеъ айнак ва дастпӯшакҳои муҳофизатӣ пӯшида шаванд.Барои реаниматсия, найчаи яхкуниро дар ваннаи обии 37°С пайваста такон додан лозим аст, то дар давоми 1-2 дақиқа маҳлули яхкунӣ пурра об шавад.Пас аз он, беруни найчаро бо салфеткаи спиртӣ пок кунед, сипас онро ба мизи ултра тоза кунед ва ҳуҷайраҳоро ба найчаи центрифуга бо 10 мл муҳити фарҳангӣ илова кунед, дар 1000 чархзанӣ барои 5-10 дақиқа центрифуга кунед, партоед. супернатант, миқдори мувофиқи муҳити фарҳангро илова кунед ва колбаро эм кунед ва дар инкубатори 5% CO2 инкубатор кунед.

3. Чаро ҳуҷайраҳоро на дар фазаи моеъ, балки дар фазаи буғи зарфи нитрогени моеъ нигоҳ доштан лозим аст?

Ҳуҷайраҳое, ки дар марҳилаи газии нитрогени моеъ нигоҳ дошта мешаванд, эҳтимоли эҳёи бештар доранд.Дар ҳоле ки дар марҳилаи моеъи нитрогени моеъ, агар қубурҳои лиофилизатсия дуруст мӯҳр карда нашуда бошанд ё ихроҷ дошта бошанд, тамоси мустақими байни ҳуҷайраҳо ва нитрогени моеъ метавонад қобилияти ҳаёти ҳуҷайраҳоро пас аз обшавӣ халалдор кунад.

4. Барои ҳуҷайраҳои суспензия, муҳити фарҳангиро чӣ гуна иваз кардан мумкин аст?

Парвариши ҳуҷайраҳои суспензияро метавон тавассути илова кардани муҳити тару тоза (агар фазо иҷозат диҳад) ё ҷудо кардани ҳуҷайраҳо аз муҳити кӯҳна тавассути центрифуга (100 xg барои 5 дақиқа) ва баъдан дубора боздоштани ҳуҷайраҳои пошидашуда дар муҳити тоза анҷом дод.Бо вуҷуди ин, барои аксари хатҳои ҳуҷайраҳои суспензия, танҳо илова кардани миёнаравӣ як усули беҳтар аст.Дар ҳар сурат, пеш аз он ки ҳуҷайраҳо ба зичии баландтарини сершавии онҳо расанд, миёна бояд нав карда шавад.Зичии сершавии ҳуҷайраҳо вобаста ба хати ҳуҷайра ва шароити фарҳанг (истирохат ё шӯриш, сатҳи оксигенатсия ва ғайра) аз 3 x 10 5 ва 2 x 10 6 фарқ мекунад.Ҳуҷайраҳо бояд ба консентратсияи камтари ҳуҷайраҳо ҳал карда шаванд, то ки барқароршавии кофии ғизо барои нигоҳ доштани ҳуҷайраҳо ба таври логарифмикӣ афзоиш ёбад.Агар муњит бе кам кардани зичии њуљайрањо оддї иваз карда шавад, њуљайрањо муњитро зуд тамом мекунанд ва мемиранд.Агар ҳуҷайраҳо дар камтар аз зичии хурдтарини худ об шаванд, онҳо ба марҳилаи ақибмонда дохил мешаванд ва хеле суст мерӯянд ё мемиранд.Ҳар як хати ҳуҷайраи суспензия зичии гуногуни сершавӣ ва фосилаи гузариш дорад, аз ин рӯ ҳисобкунии ҳаррӯзаи ҳуҷайраҳо роҳи назорати хатҳои суспензия мебошанд*.

5. Сатҳи тавсияшудаи CO2 барои фарҳанги ҳуҷайра чӣ гуна аст?

Гарчанде ки сатҳи CO2 дар системаҳои фарҳанги ҳуҷайра аз 0,03% то 40% (одатан тақрибан 0,03% СО2 дар атмосфера) фарқ мекунад, хеле маъмул аст, ки ба ҳаво СО2 илова карда нашавад ё консентратсияи CO2 аз 5% то 10%.Муҳим аст, ки консентратсияи бикарбонати натрий дар муҳити атроф барои мувозинат бо сатҳи CO2 дар марҳилаи газ танзим карда шавад.Ҳуҷайраҳо CO2 истеҳсол мекунанд ва барои афзоиш ва зинда мондан миқдори ками кислотаи карбонро талаб мекунанд.Агар CO2 илова нашавад ва ҳуҷайраҳо афзоиш ёбанд, 4 мм (0,34 г/л) бикарбонати натрийи беобро истифода бурдан мумкин аст.Аммо дар ин вакт сарпуши колбаро махкам кардан лозим аст.Агар системаи парвариши 5% ё 10% CO2 талаб кунад, мутаносибан 23,5 мм (1,97 г/л) ё 47 мм (3,95 г/л) бикарбонати натрийро дар 37°C бо рН ибтидоии тақрибан 7,6 истифода баред.Дар ин шароит колбаро кушода мондан лозим аст ё барои нигоҳ доштани мувозинати газ табақчаи Петриро истифода бурдан лозим аст.

6. Чаро ба баъзе ҳуҷайраҳо пирувати натрий ниёз доранд?Ба миёна чӣ қадар пирувати натрий илова кардан лозим аст?

Пируват як метаболити кислотаи органикӣ дар роҳи гликолитикӣ мебошад, ки ба осонӣ ба ҳуҷайра дохил мешавад ва хориҷ мешавад.Аз ин рӯ, илова кардани пирувати натрий ба муҳити атроф ҳам манбаи энергия ва ҳам манбаи карбонро барои анаболизм таъмин мекунад, ба нигоҳ доштани ҳуҷайраҳои муайяни мушаххас кӯмак мекунад, дар клонкунии ҳуҷайраҳо кӯмак мекунад ё ҳангоми кам шудани консентратсияи хуноба дар муҳити атроф зарур аст.Пирувати натрий инчунин барои коҳиш додани ситотоксикӣ аз флуоресцентсия мусоидат мекунад.Пирувати натрий одатан дар консентратсияи ниҳоии 1 мм илова карда мешавад.Маҳлулҳои пирувати натрий, ки дар тиҷорат дастрасанд, одатан маҳлули нигоҳдории 100 мм (100X) мебошанд.

Тарҷума бо www.DeepL.com/Translator (версияи ройгон).