Технологияи PCR як усули тақвияти кислотаи нуклеинӣ мебошад, ки раванди такрори ДНК-ро дар vitro тақлид мекунад.Он асосан се давраро такрор мекунад: денатуратсияи ҳарорати баланд, гармкунии ҳарорати паст ва васеъшавӣ ва сипас ДНК-и мақсаднокро миллионҳо маротиба зиёд мекунад.Ҳамин тариқ, технологияи PCR бартарии хеле ҳассос буданро дорад.Бо вуҷуди ин, ҳар як танга ду тарафи танга дорад ва бузургтарин нуқсони технологияи PCR дар он аст, ки он ба олудашавӣ хеле осебпазир аст ва миқдори хеле ками ифлосшавӣ метавонад ба мусбатҳои бардурӯғ оварда расонад.
Вақте ки ифлосшавии кислотаи нуклеин дар лаборатория рух медиҳад, таҷрибаҳои муқаррарӣ бояд қатъ карда шаванд.Пас аз он, то пайдо шудани манбаи ифлосшавӣ ё тозагии лаборатория то ба стандарт мувофиқат накунад, захираҳои назарраси моддӣ ва инсонӣ талаб карда мешаванд.Илова бар ин, ҳисоботи лабораторӣ бояд беэътибор дониста шавад.Натиҷаҳо танҳо пас аз озмоиши такрорӣ боэътимоданд.
Барои ба таври муассир пешгирӣ кардани ифлосшавӣ ва ба даст овардани натиҷаҳои устувор ва боэътимоди санҷиш, мо бояд аксар вақт барои пешгирӣ ё бартараф кардани ифлосшавӣ дар амал чораҳои муайян андешем.
лавҳаи pcr
Манбаъҳои ифлосшавӣ.
Ифлосшавии реактив
Ҳамчун зарфҳои реактивӣ, зарфҳо, об ва дигар маҳлулҳо ҳангоми тайёр кардани реагентҳои ПТР метавонанд бо кислотаҳои нуклеинӣ олуда шаванд.
Ифлосшавии таҷҳизот
Экстракторҳои нимавтоматии кислотаи нуклеинӣ ва истихроҷкунакҳои пурраи худкори кислотаи нуклеинӣ метавонанд ҳангоми истихроҷ намунаҳо ё қолабҳои кислотаи нуклеинӣ рехта шаванд ва мошинро олуда кунанд.Ё қуттии дохили таҷҳизот ба таври дақиқ тоза карда нашудааст ва моеъ ё кристаллҳои боқимонда бухор шуда аэрозолҳо ба вуҷуд меоянд, ки дар навбати худ метавонад боиси олудашавӣ гардад.
Ифлосшавии байниҳамдигарии намуна
Ифлосшавии байниҳамдигарии намуна метавонад бо омилҳои гуногун ба вуҷуд ояд: ифлосшавии контейнери ҷамъоварии намуна;рехтани зарф аз сабаби мӯҳргузории суст ҳангоми гузоштани намуна;намунаҳое, ки ба беруни контейнер часпидаанд;ифлосшавии ингалятор ва аэрозолхо дар хаво.Махсусан, вирусҳо метавонанд тавассути аэрозолҳо ё ба вуҷуд омадани аэрозолҳо паҳн шаванд, ки дар натиҷа ифлосшавии мутақобила мешаванд.
Ифлосшавии маҳсулоти PCR
Ин мушкилоти маъмултарини ифлосшавӣ дар PCR мебошад.Он одатан дар таҳлилҳое пайдо мешавад, ки кушодани пас аз тақвият ё коркарди нодурусти маҳсулот пас аз тақвият талаб мекунанд.Ин аз он сабаб аст, ки андозаи нусхаи маҳсулоти PCR аз ҳадди аксар чанд нусхаи муайянкардаи PCR хеле калонтар аст.Аз ин рӯ, миқдори хеле ками ифлосшавии маҳсулоти PCR метавонад ба мусбати бардурӯғ оварда расонад.
Клонкунии ифлосшавии плазмидҳо
Истинодҳои мусбӣ одатан дар амалиёти лабораторӣ истифода мешаванд ва аксари ин истинодҳои мусбӣ аз плазмидҳои муайяни клоншуда бармеоянд.Консентратсияи плазмидҳои клоншуда дар як ҳаҷми воҳид хеле баланд аст ва агар бодиққат истифода нашаванд, ба осонӣ олуда шудан мумкин аст.
Баъзе лабораторияҳо плазмидҳои худро ҳамчун маҳсулоти назорати сифат клон мекунанд.Аммо, пас аз тайёр кардани партовҳо ба таври кофӣ коркард карда намешаванд, ки ин боиси олуда шудани лаборатория бо плазмидҳо ва аз ин рӯ намунаҳо мегардад.
Тадбирҳо оид ба назорати ифлосшавӣ
Тақсимоти таҷрибавӣ
Оқилона ҷудо кардани лабораторияҳо.Амалиёти марҳилаҳои зеринро тақсим кунед ё тақсим кунед: коркарди намуна, омодасозии реаксияи маҳлули ПТР, пурзӯркунии давраи ПТР, муайянкунии маҳсулоти ПТР ва ғайра. Илова бар ин, диққати махсус бояд ба он дода шавад, ки коркарди намуна ва мушаххаскунии маҳсулоти ПТР аз қадамҳои дигар.
Беҳтар аст, ки онҳоро ба минтақа тақсим кунед: минтақаи коркарди намуна, минтақаи омодасозии маҳлули реаксияи ПТР, минтақаи пурқувваткунии давраи ПТР ва минтақаи мушаххаси маҳсулоти ПТР.Ва лавозимоти лабораторӣ ва аспираторҳои онҳо бояд танҳо истифода шаванд.
UV-и дар лаборатория истифодашаванда бояд пеш аз озмоиш стерилизатсия карда шавад, то ДНК ё РНК-и боқимондаро нест кунад.
Мақолаҳо барои ҳар як минтақа набояд омехта карда шаванд
Ҳар як майдони лаборатория бояд бо таҷҳизоти гуногун ва ашёҳои гуногун бо ранги намоён нишон дода шавад, то ки таҷҳизот ва ашё аз минтақаҳои гуногуни корӣ омехта нашавад.Масалан, либоси корӣ, пойафзоли корӣ, қуттиҳои партов, моп, латта, қалам ва ғайра танҳо дар ҳар як минтақа истифода мешаванд.
Маслиҳатҳои пипеткаҳои якдафъаина, найҳои центрифуга, дастпӯшакҳои тоза, ниқоб ва ғайраро истифода баред.
Системаи стандартии кондиционер ва вентилятсияро таъсис диҳед
То ҳадди имкон системаҳои кондитсионерии пурраи интиқол ва ихроҷро истифода баред.Ҳангоми дастрасӣ ба ҳар як минтақаи амалиёт, як самти ягонаи ҷараён лозим аст, яъне майдони омодасозӣ ва нигоҳдории реактив → минтақаи омодасозии намуна → минтақаи пурзӯрсозии ПЗР → минтақаи таҳлили маҳсулоти пурқувват, бидуни ҷараёни ретроград.
Мониторинги ифлосшавӣ
Мониторинги ифлосшавӣ тавассути андешидани чораҳои зерин амалӣ карда мешавад: ташкили назорати мусбӣ ва манфӣ, такрори санҷишҳо, интихоби праймерҳо барои минтақаҳои гуногун барои тақвияти ПЗР ва ғайра.
Тозакунии мунтазами лаборатория
Маҳлули безараргардонии дорои хлори фаъоли 0,5% тайёр кунед, то рӯи таҷҳизот, тахтаҳо, фаршҳо, рӯи маснуот, қуттиҳо, дару тирезаҳоро тоза кунед ва қуттиҳои партовро дар дохили таҷҳизот тар кунед.
Пошидани машрубот ба ҳаво аз рӯи принсипи боло ба поён, дарун-берун анҷом дода мешавад.
Пипеткаҳо, центрифугаҳои ҳашттюбка, миксер ва дигар таҷҳизоти хурдро бо спирт (75%) тоза кунед.
Сатҳи таҷҳизот, тахтаҳо ва фаршҳоро бо оби тоза тоза кунед ва зарфҳои партови таҷҳизотро бо оби тозашуда бишӯед.
Тарҷума бо www.DeepL.com/Translator (версияи ройгон)
Вақти фиристодан: сентябр-28-2022